单核细胞增生李斯特氏菌的检验方法

1、李斯特氏菌的生物学特性

该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌，在纯培养物中呈短小杆菌，在初龄培养物中呈球杆菌状，在老龄培养物中呈长丝的长杆菌状，有些细菌因此而变成革兰氏阴性；为需氧或兼性厌氧菌，在20～25℃培养时能形成4根鞭毛，运动活泼；在37℃培养时无鞭毛，运动消失。
该菌对营养要求不高，在普通营养培养基上即能生长，最适于含有CO2的微需氧环境中生长。生长温度为1～45℃，而以30～37℃最合适，能在普通冰箱冷藏室生长，具有耐冷特性，是冷冻饮品食物中毒的重要致病菌之一。

号称冰箱里的杀手的单核细胞增生李斯特氏菌

2、李斯特氏菌的分类

李斯特菌属（Listeria）现分为2群7种，分别是单核细胞增生性李斯特菌（L.monocytogenes 以下统称 LM）、伊氏李斯特菌（L.ivanovii）（也称绵羊李斯特菌）、英诺克李斯特菌（L. innocua）（也称无害李斯特菌）、韦氏李斯特菌（L.welshimei）、塞氏李斯特菌（L.seeligeri）、格氏李斯特菌（L.gmyi）和莫氏李斯特菌（L.murmyi）。其中LM是引起动物和人类疾病的重要致病菌。LM是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是迄今发现唯一能对人致病的、典型的胞内寄生菌，能在巨噬细胞、上皮细胞、内皮细胞和肝细胞内增殖。

3、LM的致病性

LM轻则能导致肠胃炎，重症能引起能引起人和动物患脑膜炎、脑炎、败血症、心内膜炎、流产、脓肿和局部的脓性损伤，可造成孕妇流产、死胎等疾病，发病者死亡率可达20%～70%。

4、LM的检查方法

1）传统微生物培养方法：国标法GB 4789.30—2010检验程序

2）免疫学检测方法（聚合酶免疫检测方法EIA）：对LM菌抗原有高度特异性的抗体固定在微孔内壁上，经增菌培养后的样品和阳性对照加到检测板的微孔内。如有LM菌抗原存在，则在微孔内形成抗体—抗原混合物，用405～410nm的光度计读数，计算临界值，可疑阳性结果需经培养方法证实。

自动酶联荧光免疫检测系统（VIDAS）：对李斯特菌属全部筛检，VIDASLMO只对李斯特菌属中主要致病菌——单增李斯特菌的筛检。李斯特菌抗原鉴别是基于在VIDAS仪器内进行酶联荧光免疫分析

3）分子生物学技术：

常规PCR法：利用PCR-限制酶分析，脉冲凝胶电泳和DNA探针对李斯特氏菌进行鉴定和分型；

DNA探针技术：用特异性DNA探针进行LM菌核糖体RNA（rRNA）的检测，检测样品经前增菌和二次增菌后溶解细菌，加入标记好的LM特异性DNA探针用于液相杂交，在450nm处测量吸光值，吸光值大于临界值则表明在待检的样品中存在LM；

Lamp技术（环介导等温扩增）：lamp技术不需要热循环，为等温扩增，lamp反应中将会产生的大量副产物—白色焦磷酸镁沉淀，扩增产物不经过电泳，通过肉眼观察即可观察结果。新奥门免费资料大全新牌门推出恒温荧光检测仪，以恒温PCR技术为核心，采用实时荧光检测的方法，直观反应扩增结果，操作简单，只需四步即可检验食品中的LM。