怎么知道三文鱼有没有感染异尖线虫?
发布日期:2020年04月01日 阅读量:近日,在央视报道“青藏高原很早以前就开始养殖三文鱼,目前已经占据了国内三文鱼三分之一的市场”之后,有关“淡水三文鱼能不能生吃”的争论一直在持续。青海龙羊峡水库检测寄生虫的操作更是引起广大网友质疑。
青海龙羊峡水库镜检寄生虫
那么,检测三文鱼的寄生虫主要是检测什么?又有什么样的检测方法呢?
在感染三文鱼的寄生虫中,以异尖线虫(Anisakis)最为臭名昭著。异尖线虫不仅能感染三文鱼,也能感染同为哺乳动物的人类。
异尖线虫
异尖线虫,又称海兽胃线虫。属于线虫的一种寄生虫,通体白色。属于线虫动物门、胞管肾纲、蛔目、异尖科。
异尖线虫的形态结构
异尖线虫的生活史
①成虫附于最终宿主(last host)的胃或肠道黏膜,产卵在寄主肠道且随粪便至海中。
②卵在海中发育2~3期幼虫为海洋甲壳类摄食入体内,此时海洋甲壳类为为第一中间宿主(primary middle host)。
③海洋甲壳类动物被鱼类或是乌贼等第二中间宿主(secondary middle host)摄食进入体内,侵入中间宿主的体腔或是肌肉内,幼虫在此时并不发育。
④海洋哺乳类(海豹、海狮、海豚、海狗、海象、鲸鱼)摄食第二中间宿主,幼虫会在其肠道发育为第三期幼虫、成熟的成虫,并交配产卵。
⑤人类为此病原的终结宿主(dead-end host),人不是异尖线虫的适宜宿主,进入人体的幼虫并不变为成虫,而是在胃肠内形成一种被称为好酸球性肉芽肿的病变。
可引起人体异尖线虫病(anisakiasis)的虫种主要有5属:即异尖线虫属、海豹线虫属、钻线虫属、对盲囊线虫属和鲔蛔线虫属。
在人体寄生的虫体均为第3期幼虫,中肠部体宽为430~550μm,无侧翼,幼虫黏附胃肠道黏膜或入组织,引起恶心、下痢、呕吐、荨麻疹等不适症状。
检测异尖线虫的方法有3种:镜检法、PCR法、恒温PCR法。
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镜检法
(1)临床观察
观察判定待检鱼的种类、来源。检查临床症状、大体情况。
(2) 剖检
测量每条鱼的质量及长度;解剖鱼体,观察病理变化,检查腹腔、胃、肠、肠系膜、肝、生殖腺等器官及肌肉组织等处有无虫体或褒包。
(3) 病理变化观察
检查、观察消化道、腹腔及内脏等各处病理变化。
(4) 虫体检查
用小摄子、昆虫针、手术刀轻轻取出虫体或从褒包内分离出虫体,将虫体置于0. 85% 生理盐水培养皿中,清除虫体周围杂物,迅速观察并计数,虫体立即用5% 福尔马林固定,将固定之虫体置于乳酸酚甘油混合液中透明后,观察虫体外形及内部形态。观察虫体用带测微尺的显微镜,将虫体置于载玻片上,先在低倍镜,进一步用高倍镜观察,测量、描绘、记录虫体形态结构,必要时做显微摄影。
(5)结果
主要依据对鱼类剖检,发现虫体,其特征符合者,可判断为本病阳性。
剖检发现相应病变和虫体,虫体特征符合异尖线虫病病原特征者,判断为本病阳性。
剖检未发现明显病变,但检出符合异尖线虫病病原特征的虫体者,判断为本病阳性。
剖检发现其他线虫者,判断为相应的线虫感染。
镜检的特点:
✘ 要求操作人员专业性较强
✘ 对异尖线虫的生活史较熟悉
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PCR法
(1)DNA 的提取
提取异尖线虫样品的DNA。
(2)PCR 扩增
DNA变性(90℃-96℃):双链DNA模板在热作用下氢键断裂,形成单链DNA。
退火(60℃-65℃):系统温度降低,引物与DNA模板结合,形成局部双链。
延伸(70℃-75℃):在Taq酶的作用下,以dNTP为原料,从引物的3′端开始以从5′→3′端的方向延伸,合成与模板互补的DNA链。
(3)PCR 产物电泳与测序
取 PCR 产物加入漠酚蓝指示剂溶液,混匀,用1. 0% 琼脂糖于TAE 缓冲溶液中电泳分离紫外透射仪下检查是否存在目的条带。存在目的条带,则取PCR 扩增产物测序。得到的序列与GcnBank 数据库中的参考序列进行比对。
(4)结果
PCR 扩增产物测序,序列与参考序列进行比较,序列相似性仵98% 以上者,判定虫体为简单异尖线虫幼虫。
PCR法的特点:
✘ 要求操作人员对PCR的原理较为熟悉
✘ 实验操作能力较强
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恒温PCR法
新奥门免费资料大全新牌门推出了异尖线虫核酸检测试剂盒,异尖线虫(Ani)核酸检测试剂盒(一管式恒温荧光法)可结合Dhelix Q5水产病害检测仪,利用恒温PCR原理,在65°C的恒温条件下反应,利用Bst DNA聚合酶完成置换扩增。双螺旋基因生产的异尖线虫(Ani)核酸检测试剂盒基于独特的恒温荧光检测技术,可针对食品、动物组织等样品中病原的特异核酸片段进行扩增,通过实时扩增曲线判定结果。本产品用于对异尖线虫(Ani)的检测,检出限为103copies/μl 基因组DNA。
恒温PCR法的特点:
☑ 全面:30多种病害
☑ 快速:60分钟可出结果
☑ 专业:研发能力强大,产品更新快速,检测病害种类全面(细菌、病毒、寄生虫)
☑ 简便:移动携带现场检测